SOUTHERN BLOT LÀ GÌ

     

phương thức lai Southern blot là cách thức lai giữa DNA của tế bào với mẫu mã dò DNA. Phương pháp này có thể chấp nhận được nghiên cứu giúp DNA của bộ gen, kiểm tra tác dụng chuyển ren hoặc kiểm tra sự xuất hiện của một gen nào kia trong bộ gen của tế bào.Southern blot - một kĩ thuật đa phần trong vấn đề phân tích cấu tạo của gene, được cách tân và phát triển vào giữa thập niên 1970 vì chưng Edwin Southern ở MRC một cỗ phân của genome động vật hoang dã hữu nhũ sống Edinburgh (Southern, 1975).

Bạn vẫn xem: Southern blot là gì




Bạn đang xem: Southern blot là gì

*



Xem thêm: Anten Dvb T2 Trong Nhà Hd88, Anten Trong Nhà Bắt Sóng Dvb

*



Xem thêm: Cách Trộn Kem Không Bị Chảy Nước Vàng, Cách Khắc Phục Kem Trộn Bị Chảy Nước

ai đang xem trước trăng tròn trang tài liệu Phương pháp southern blot, giúp thấy tài liệu hoàn chỉnh bạn click vào nút tải về ở trênGVHD:Trần Thị DungSVTH:Nguyễn Thị Hoàng Yến61103239Nguyễn Văn Cư61103020Huỳnh Thị Mai Thy61103315MÔN KỸ THUẬT DI TRUYỀNPHƯƠNG PHÁP SOUTHERN BLOTMục lục:I. Reviews về phương pháp Southern blot.II. Nguyên tắc và nguyên tắc.1.Nguyên lý.2.Nguyên tắc.III. Sản xuất mẫu dò.1.Tạo chủng loại dò nhờ Plasmid2.Tạo Probe nhờ vận dụng PCR3.Đánh dấu ProbeIV. Các bước của cách thức Southern Blot.1.Giai đoạn 1.2.Giai đoạn 2.3.Giai đoạn 3.V. Ứng dụng.Giới thiệu về phương pháp Southern blotPhương pháp lai Southern blot là phương pháp lai thân DNA của tế bào với chủng loại dò DNA. Phương pháp này chất nhận được nghiên cứu giúp DNA của bộ gen, kiểm tra công dụng chuyển gen hoặc bình chọn sự có mặt của một ren nào kia trong bộ gen của tế bào.Southern blot - một kĩ thuật chủ yếu trong câu hỏi phân tích cấu tạo của gene, được cách tân và phát triển vào giữa thập niên 1970 vị Edwin Southern ở MRC một bộ phân của genome động vật hữu nhũ sống Edinburgh (Southern, 1975). Edwin Southern phương thức Southern Blot được xúc tiến nhờ một trong những kỹ thuật gốc rễ của công nghệ sinh học tập phân tử như:Tách tách genPCRThẩm tích các phân tử acid nucleotide lên màng laiLai phân tử (lai với chủng loại dò sệt hiệu)Đến nay, chuyên môn lai Southern sẽ được cách tân đi cực kỳ nhiều, đa số bao gồm: tăng mức độ nhạy Giảm một vài bước trong quy trình laiGiảm thời gian thực hiện nay Vẽ kỹ năng ngày nay đơn giản hơn rất nhiều.II. Nguyên tắc và Nguyên tắcIII. Sản xuất mẫu dò (probe)Tạo mẫu mã dò dựa vào PlasmidCắt plasmid và DNA đã tách chiết từ bỏ tế bào do cùng một loại enzyme.Gắn DNA vào plasmid trong điều kiện môi trường xung quanh phù hợp.Thực hiện phát triển thành nạp vào vào tề bào vi khuẩn.Nhân những tế bào vi kuẩn và chọn lọc.Tách plasmid từ những tế bào lựa chọn lọc.Tách mẫu dò (đoạn DNA).Đánh dấu mẫu mã dò.Tạo Probe nhờ vận dụng PCRThiết lập mồi và ghi lại phóng xạ vào các mồi.Biến tính mẫu DNA thành các sợi đơn.Gắn mồi vào những sợi đơn.Tổng hợp các sợi DNA mới.Biến tính để bóc tách các chuỗi new vừa tổng phù hợp thành những sợi đơn.tiếp tục quay về gắn mồi vào các sợi đơn.Đánh dấu mẫu dòGồm có 4 hướng pháp:Phương pháp Nick-translationPhương pháp random primingPhương pháp khắc ghi các oligonucleotidePhương pháp chế tác mẫu dò RNA (riboprobe)Phương pháp Nick-translationDNAse I tạo những khía trên DNA ở các vị trí bỗng nhiên khác nhau.DNA polymerase với hoạt tính exonuclease 5’-3’, giảm mạch DNA theo chiều 5’-3’ theo những khía đã tạo thành sẵn, đồng thời, tổng vừa lòng bù đoạn thiếu với việc tham gia của nucleotide đánh dấu (thường là dATP)Kết trái là DNA được đánh dấu.Phương pháp random primingDNA kép được biến hóa tính bằng nhiệt thành 2 mạch đơn.Hỗn hợp những oligonucleotide tổng hợp có thêm vào, trở thành mồi (primer) cho DNA polymerase tổng hòa hợp mạch xẻ sung.Một vào 4 các loại nucleotide bổ sung vào được tấn công dấu, đề xuất 2 mạch bắt đầu tổng hợp cũng khá được đánh dấu.3. Cách thức đánh dấu những oligonucleotideCác oligonucleotide được tổng hợp dưới dạng mạch 1-1 rồi được ghi lại ở đầu 5’ nhờ vào enzyme T4 polynucleotide kinase với sự hiện diện của một nucleotide đánh dấu. Sau phản nghịch ứng các nuclotide từ do cũng khá được loại bỏ bằng sắc kí thanh lọc gel, sắc kí lỏng cao áp (HPLC),4. Cách thức tạo mẫu dò RNA (riboprobe)Trước hết, trình từ DNA dùng làm sản xuất mẫu dò RNA phải được đưa vào trong 1 vector bao gồm mang những promoter.Vector này được cắt ra thành dạng mạch thẳng; sau đó, RNA polymerase thích hợp được tiếp tế phản ứng cùng với các nucleotide đánh dấu.RNA polymerase vẫn phiên mã trình từ bỏ DNA bắt đầu từ promoter, tạo nên một lượng lớn RNA tấn công dấu.Sau bội phản ứng, vector gồm mang trình trường đoản cú DNA nơi bắt đầu bị DNase I phân hủy, những enzyme được vứt bỏ qua tách chiết bởi phenol với RNA được tinh không bẩn trên sắc kí thanh lọc gel.IV.Quy trình của phương thức Southern blotGiai đoạn 1Giai đoạn 2Chuyển DNA vừa trở thành tính lên màng lai (màng nylon hoặc nitrocellulose). Hiệ tượng của thừa trình:Là sự mao dẫn của dung môi (thường là NaOH/NaCl)qua lớp gel từ nơi có thế nước sanh trọng nơi gồm thế nước thấp, sở hữu theo DNA đính thêm lên màng lai được sắp xếp ngay bên trên lớp gel.Quá trình này diễn ra trong 2 tiếng đồng hồ hoặc có thể dùng sản phẩm công nghệ thấm hút chân không.Tương tác ion thân màng lai (tích năng lượng điện dương) cùng DNA (tích năng lượng điện âm) tạo ra lực hút, gắn thêm kết các DNA lên màng lai.Trong quy trình chuyển, vị trí những DNA không thế đổi.Màng lai sau quy trình trên, được cách xử trí nhiệt (800 trong 2 giờ) hoặc chiếu tia UV (vài phút) để thắt chặt và cố định DNA trên màng.Cách tiến hành:Đặt gel lên giá chuyển máy Bloting để gửi nguyên vẹn các sợi DNA vươn lên là tínhDung dịch dẫn đưa là NaOH 0.4MMàng lai sẽ giữ cố dịnh các đoạn DNA được đưa lên từ gel năng lượng điện liGiai đoạn 3IV.Ứng dụngSouthern blot được sử dụng để đánh giá bạn dạng copy của ren trong genome, xác định các intron, exon, những đoạn bị bỗng dưng biến thêm hoặc mất đoạnKhi sử dụng những DNA marker khác nhau làm chủng loại dò, hoàn toàn có thể phân biệt được các loài, các loài đồng hình.Southern blot – RFLP : giúp phát hiện tại sự phong phú chiều dài những đoạn cắt vì chưng RE, qua đó, nhận thấy sai biệt dt ở vị trí phân biệt của những RE dẫ đến sai biệt vào chiều dài của các đoạn DNA tạo nên từ RE đó. Đòng thời RFLP còn sử dụng để xác minh huyết thống, lập phiên bản đồ số lượng giới hạn gene.Truy tra cứu tội phạm phụ thuộc dấu dấu hiện trường.Chuẩn đoán căn bệnh thai nhi.Tài liệu tham khảo:Sinh học phân tử - hồ nước Huỳnh Thùy Dươngwww.Wikipedia.orgTHE END THANKS FOR WATCHING !